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產(chǎn)品名稱(chēng):

CRL-1420MIA PaCa-2人胰腺癌細(xì)胞

產(chǎn)品型號(hào): 產(chǎn)品時(shí)間: 2024-07-30
CRL-1420MIA PaCa-2人胰腺癌細(xì)胞
細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理與技術(shù) 現(xiàn)代生物技術(shù)一般認(rèn)為包括基因工程技術(shù)、細(xì)胞工程技術(shù)、酶工程技術(shù)和發(fā)酵工程技術(shù),而這些技術(shù)的發(fā)展幾乎都與細(xì)胞培養(yǎng)有密切關(guān)系,特別是在醫(yī)藥領(lǐng)域的發(fā)展,細(xì)胞培養(yǎng)更具有特殊的作用和價(jià)值。

產(chǎn)品概述

CRL-1420MIA PaCa-2人胰腺癌細(xì)胞

規(guī)格:25cm2培養(yǎng)瓶一瓶
特點(diǎn):細(xì)胞代數(shù)為2-3代 
包裝:內(nèi)層無(wú)菌自封袋;防壓泡沫盒;外層防壓保溫氣泡袋;說(shuō)明書(shū) 
細(xì)胞來(lái)源:ATCC、DSMZ、ECACC以及少數(shù)國(guó)內(nèi)外大學(xué)建系。 
貨期:1-2周 
運(yùn)輸方式:快遞運(yùn)輸 

 

二、無(wú)菌操作基本技術(shù) 
1. 實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前,無(wú)菌室及無(wú)菌操作臺(tái)(laminar flow) 以紫外燈照射30-60 分鐘滅菌,以70 % ethanol 擦拭無(wú)菌操作抬面,并開(kāi)啟無(wú)菌操作臺(tái)風(fēng)扇運(yùn)轉(zhuǎn)10 分鐘后,才開(kāi)始實(shí)驗(yàn)操作。每次操作只處理一株細(xì)胞株,且即使培養(yǎng)基相同亦不共享培養(yǎng)基,以避免失誤混淆或細(xì)胞間污染。實(shí)驗(yàn)完畢后,將實(shí)驗(yàn)物品帶出工作臺(tái),以70 % ethanol 擦拭無(wú)菌操作抬面。操作間隔應(yīng)讓無(wú)菌操作臺(tái)運(yùn)轉(zhuǎn)10 分鐘以上后,再進(jìn)行下一個(gè)細(xì)胞株之操作。
2. 無(wú)菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞,必要物品,例如試管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暫時(shí)放置,其它實(shí)驗(yàn)用品用完即應(yīng)移出,以利于氣流之流通。實(shí)驗(yàn)用品以70 % ethanol 擦拭后才帶入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)。實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在抬面之中央無(wú)菌區(qū)域,勿在邊緣之非無(wú)菌區(qū)域操作。
3. 小心取用無(wú)菌之實(shí)驗(yàn)物品,避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口,亦不要在打開(kāi)之容器正上方操作實(shí)驗(yàn)。容器打開(kāi)后,以手夾住瓶蓋并握住瓶身,傾斜約45° 角取用,盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。
4. 工作人員應(yīng)注意自身之安全,須穿戴實(shí)驗(yàn)衣及手套后才進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。對(duì)于來(lái)自人類(lèi)或是病毒感染之細(xì)胞株應(yīng)特別小心操作,并選擇適當(dāng)?shù)燃?jí)之無(wú)菌操作臺(tái)(至少Class II)。操作過(guò)程中,應(yīng)避免引起aerosol 之產(chǎn)生,小心毒性藥品,例如DMSO 及TPA 等,并避免尖銳針頭之傷害等。
5. 定期檢測(cè)下列項(xiàng)目:
5.1. CO2 鋼瓶之CO2 壓力 
5.2. CO2 培養(yǎng)箱之CO2 濃度、溫度、及水盤(pán)是否有污染(水盤(pán)的水用無(wú)菌水,每周更換)。
5.3. 無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)之a(chǎn)irflow 壓力,定期更換紫外線燈管及HEPA 過(guò)濾膜,預(yù)濾網(wǎng)(300小時(shí)/預(yù)濾網(wǎng),3000 小時(shí)/HEPA)。
6. 水槽可添加消毒劑(Zephrin 1:750),定期更換水槽的水

1、請(qǐng)問(wèn)工作濃度的胰酶是不是應(yīng)保存在-20度?如果放在4度冰箱可以保存多久呢?是不是幾個(gè)小時(shí)就會(huì)失去活性?
平時(shí)放在-20度,分裝在50毫升螺口管,用時(shí)拿一管放4度用。

2. 粉末培養(yǎng)基配制好后(加了血清),一般在4度盡量不要超過(guò)1個(gè)月,如在-20度存放時(shí)間可長(zhǎng)一些,但*好也不要超過(guò)3-4個(gè)月,可能對(duì)于永生化細(xì)胞株來(lái)說(shuō)要求不是太高,但我在過(guò)去的4年里一直是做原代細(xì)胞培養(yǎng)的,細(xì)胞嬌弱,經(jīng)驗(yàn)表明放置時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)。
認(rèn)真按照操作規(guī)程進(jìn)行實(shí)驗(yàn),一般不大會(huì)導(dǎo)致污染,很多情況下是由于所用的試劑或培養(yǎng)基有污染而使實(shí)驗(yàn)失敗,
 
3. 關(guān)于實(shí)驗(yàn)用品的清洗與消毒,我的經(jīng)驗(yàn)是:用過(guò)的玻璃器皿先在清水中浸泡30min以上,然后加少許清洗劑,以超聲波洗滌30min左右,(如無(wú)超聲波洗滌器可用軟毛刷輕輕刷洗干凈),撈出晾干,再在鉻酸洗液中浸泡6-18h(或過(guò)夜)后,自來(lái)水清洗10-15遍,雙蒸水清洗3-4遍,晾干,高壓消毒后即可使用。
許多塑料制品也可以高壓消毒,例如培養(yǎng)瓶蓋,膠塞,吸頭等。不能用于高壓的一般均已制成一次性作用的商品了,當(dāng)然如果money有限,如進(jìn)口的培養(yǎng)板、皿等,也可以重復(fù)使用1-2次,我當(dāng)時(shí)使用方法是將其*清潔后,使用前在紫外燈下敞開(kāi)照射1-1.5h即可,我做過(guò)多次,沒(méi)有出現(xiàn)問(wèn)題。塑料培養(yǎng)瓶由于清洗消毒不便,*好不要重復(fù)使用,如一定要重復(fù)用,可用環(huán)氧乙烷等消毒,(消毒后一定要放置半年以上方可使用)

在光鏡下,上皮細(xì)胞通常呈“鋪路石”樣排布,細(xì)胞之間有拉絲現(xiàn)象(即距離較遠(yuǎn)的細(xì)胞可以通過(guò)細(xì)長(zhǎng)的觸手相連),細(xì)胞有成片生長(zhǎng)的特性。而間質(zhì)細(xì)胞通常呈梭形,沒(méi)有有成片生長(zhǎng)的特性,細(xì)胞之間的聯(lián)系不緊密。但是細(xì)胞的形態(tài)特征會(huì)因?yàn)樯L(zhǎng)條件的改變而改變,如HeLa細(xì)胞是上皮細(xì)胞,但是在酸性培養(yǎng)條件下會(huì)變?yōu)樗笮?。上皮?xì)胞之間都有特征性的緊密連接(橋粒)結(jié)構(gòu),因此可以通過(guò)觀察培養(yǎng)細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)來(lái)判斷細(xì)胞的類(lèi)型,如果有緊密連接,就必然是上皮細(xì)胞。這是一錘定音的證據(jù)。注意不要把細(xì)胞消化下來(lái)做電鏡,要用細(xì)胞刮刮下來(lái)后做電鏡。此外每一種上皮細(xì)胞都有其特征的細(xì)胞角蛋白的表達(dá)(cytokertin, CK),可以查一下子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞表達(dá)的CK分子,然后進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)的鑒定。
在偏堿的情況下培養(yǎng),耐受能力會(huì)逐漸下降,可能是產(chǎn)生脫壁現(xiàn)象的原因,后來(lái)我重新測(cè)了一下培養(yǎng)基,為7.5左右,我用滅菌的HCL調(diào)了一下,培養(yǎng)基顏色變成淡紅透亮,再次培養(yǎng),發(fā)現(xiàn)細(xì)胞貼壁比較好了,搏動(dòng)效果也不錯(cuò),因此,我以后每次培養(yǎng)前都要重新調(diào)好PH值,我覺(jué)得很多因素是能影響PH值的
血清質(zhì)量不好,影響了細(xì)胞生長(zhǎng)。所以,我認(rèn)為以后養(yǎng)細(xì)胞,用的血清濃度*好是每批次血清都摸一下,不一定要以參考文獻(xiàn)為準(zhǔn),畢竟國(guó)產(chǎn)的血清質(zhì)量差異比較大啊。
人結(jié)腸腺癌細(xì)胞系;LS123細(xì)胞無(wú)菌操作是關(guān)鍵,對(duì)于配制培養(yǎng)液時(shí),有些人為了讓培養(yǎng)粉充分溶解,攪拌4小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間。其實(shí)這*沒(méi)有必要,一般培養(yǎng)基的固體組分還是易溶于水的,攪拌的時(shí)間長(zhǎng)了會(huì)增加污染機(jī)會(huì),雖然后來(lái)濾過(guò)除菌了,但細(xì)菌的代謝產(chǎn)物比如脂多糖誰(shuí)能夠把它濾掉?細(xì)菌的代謝是很快的,甚至在常溫下20min就可以繁殖一代,太可怕了。我的經(jīng)驗(yàn)就是攪拌30min-60min就把它過(guò)濾。
另外關(guān)于培養(yǎng)基的pH問(wèn)題,一般按照說(shuō)明書(shū)操作,加入所說(shuō)的NaHCO3量,與預(yù)計(jì)的pH不會(huì)有什么距離,也就是說(shuō)基本上不用調(diào)pH,如果相差大,要考慮三蒸水的質(zhì)量是否有所下降,當(dāng)然這時(shí)調(diào)pH也是不得已而為之。我配培養(yǎng)基時(shí)基本上不調(diào)pH,只是用試紙檢測(cè)一下pH,觀察一下培養(yǎng)基的顏色。

(1)東西一定要用自己的。既不要借別人的,也不要借給別人??赡艽蠹矣X(jué)得比較自私。實(shí)際上還是很有好處的。并不是每個(gè)人的操作都規(guī)范,因此相互之間串著用,很容易造成交叉污染。
(2)我習(xí)慣口對(duì)口倒液體,在倒前倒后都要在酒精燈上過(guò)一下。自己認(rèn)為比起用吸管吸更能很好的防止污染。步驟越簡(jiǎn)單,越能防止污染。而且還能節(jié)省很多吸管。
(3)一次將所有的所需要試劑、工具放入工作臺(tái)。不要做到半路,又出工作間拿東西,這樣增加了污染的機(jī)會(huì)。
(4)整個(gè)操作要快、動(dòng)作要輕、而且不要干其他的事情。比如手機(jī)響了,*好不要接。我一般操作的時(shí)候?qū)⑹謾C(jī)關(guān)了,手機(jī)聲音響起,好煩躁。
(5)我一般開(kāi)紫外線照射臺(tái)的時(shí)候,就將培養(yǎng)基、酶、DHANKS液那到室外讓它自然升溫。這樣40分鐘后,溫度也升上來(lái)了。有很多人將他放到37度水浴鍋里加熱。一定要注意水浴鍋的衛(wèi)生,有的常年不清洗,里面很臟,容易在外面瓶身上吸附大量細(xì)菌。因此用它的也一定要勤換水。從水域鍋那出后,*好找個(gè)毛巾插干上面的水。
(6)操作前要洗手,用75%酒精搽手。用完操作臺(tái),要打掃衛(wèi)生。
人結(jié)腸腺癌細(xì)胞系;LS123細(xì)胞要經(jīng)常凍存,我一般只要細(xì)胞狀態(tài)好就將細(xì)胞凍存起來(lái)。細(xì)胞狀態(tài)差了,扔掉,重新復(fù)蘇。這是一個(gè)必須養(yǎng)成的習(xí)慣。畢竟很多情況下,細(xì)胞并不是因?yàn)槲廴玖?,才讓你感到頭痛。這樣你不會(huì)擔(dān)心沒(méi)有種子了。我一般是不加雙抗的,只要注意,不會(huì)污染。

過(guò)濾時(shí)不要用槍吹細(xì)胞!! 如果用力吹,篩網(wǎng)就像刀片一樣,把你的細(xì)胞全部切碎!!

刷玻璃器皿的過(guò)程:初洗、泡酸(一天)、自來(lái)水沖洗(10遍)、純化水沖洗(3遍)、注射用水沖洗(3遍)。感覺(jué)過(guò)于苛刻,自來(lái)水只沖洗3遍。被老師發(fā)現(xiàn)后,一陣痛批,才知道這是極其關(guān)鍵的一步,殘留的酸可能會(huì)抑制細(xì)胞生長(zhǎng),甚至導(dǎo)致細(xì)胞死亡,痛失辛苦得來(lái)的細(xì)胞,心血付之東流。無(wú)知不能無(wú)畏,一定不能大意。

做好準(zhǔn)備工作。不要急于投身到人結(jié)腸腺癌細(xì)胞系;LS123細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)中去,要先設(shè)定計(jì)劃:步驟,工具,試劑。特別是將細(xì)胞用于大規(guī)模生產(chǎn)時(shí),尤其如此。eg.經(jīng)過(guò)干熱滅菌的容器一般認(rèn)為可以在一周內(nèi)保持無(wú)菌狀態(tài),如果準(zhǔn)備多了,用不完的就得重新滅菌,耗費(fèi)能源、占用滅菌空間,不值得;干熱滅菌需要一天的時(shí)間,當(dāng)器皿準(zhǔn)備不足時(shí),只能干著急,錯(cuò)過(guò)了*佳操作時(shí)間,也許得很久才能將細(xì)胞狀態(tài)再調(diào)整好。

對(duì)于驕氣的細(xì)胞,我一般都是*天處理完后,加少量培基(夠蓋住瓶底部),第二天換液,以免死細(xì)胞和碎片對(duì)活的產(chǎn)生不良影響。

新配的培養(yǎng)基直接用很清亮,但是在-20度保存一段時(shí)間后再溶解就要出現(xiàn)很多雜質(zhì),用37度水孵育沒(méi)有效果,握在手里不停搖動(dòng)非常有效。其實(shí)對(duì)于操作熟練的人來(lái)說(shuō),污染并不是我們想像那樣容易出現(xiàn),園子里很多人都問(wèn)否污問(wèn)題,而培養(yǎng)基的PH值往往被忽略,而且大多數(shù)人都習(xí)慣于一次配制1升培養(yǎng)基,分裝成10X100ml,用1瓶,另外9瓶放在-20度保存,很容易出現(xiàn)結(jié)晶,鏡下看就是一些桿狀的物資,有時(shí)候晃動(dòng)培養(yǎng)基,肉眼就可以看到很多沉淀,這就需要我們?cè)谟弥昂煤脫u勻了。
凍存: 當(dāng)人結(jié)腸腺癌細(xì)胞系;LS123細(xì)胞細(xì)胞狀態(tài)好,或者代數(shù)比較早,一定要大量?jī)龃?,不要吝惜暫時(shí)的大批使用血清,當(dāng)細(xì)胞狀態(tài)不好,長(zhǎng)不起來(lái)的時(shí)候,馬上取出來(lái)復(fù)蘇,省時(shí)省力,不要去嘗試努力恢復(fù)狀態(tài)不好的細(xì)胞,費(fèi)時(shí)間也費(fèi)血清,會(huì)令你痛苦不堪。另外凍存的細(xì)胞不要放到一個(gè)地方,-80度,液氮(甚至不同的液氮罐)都放一點(diǎn),誰(shuí)也不敢保證不出意外,冰箱也可能有化的時(shí)候(我們-20度冰箱就化過(guò)),都放在一塊容易全軍覆沒(méi)。 

按照試劑的保存標(biāo)準(zhǔn)保存,象血清、胰酶等沒(méi)開(kāi)封的-20℃,開(kāi)封后-4℃保存一般不超過(guò)7天(用完它吧,不然浪費(fèi)了)
5、一定要弄清楚每個(gè)組分的作用,特點(diǎn),比如NaHCO3容易分解,因此培養(yǎng)基在過(guò)濾除菌時(shí)pH會(huì)上升,一般是0.1-0.3,所以在過(guò)濾之前,要把培養(yǎng)基的pH調(diào)低0.1-0.3。如果你不了解NaHCO3容易分解的特點(diǎn),就不會(huì)做相應(yīng)的處理,那么培養(yǎng)基不符和要求,細(xì)胞就長(zhǎng)不好
臺(tái)盼藍(lán)主要用來(lái)鑒定原代培養(yǎng)細(xì)胞時(shí),細(xì)胞分離后的存活情況,用0.4%臺(tái)盼藍(lán)直接染色5-10分鐘,在顯微鏡下觀察即可,活細(xì)胞不被染色。方便易用,因此在實(shí)驗(yàn)室中比較常用,尤其在心肌細(xì)胞原代培養(yǎng)中。

MHH-CALL-4急性淋巴細(xì)胞B細(xì)胞白血病細(xì)胞

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