IMR-90人胚肺成纖維細(xì)胞

【產(chǎn)品產(chǎn)地】ATCC
【細(xì)胞形式】?jī)龃婕皬?fù)蘇
【質(zhì)量控制】本細(xì)胞經(jīng)過了檢測(cè)，不含有細(xì)菌、真菌、病毒（HIV、HBV、HCV）、支原體。
【培養(yǎng)條件】37℃，5% CO2，PH值7.2~7.4，無菌恒溫培養(yǎng)。
【研究范圍】本產(chǎn)品只提供科研使用，不可應(yīng)用于治療等其他方面。
活力檢測(cè)操作步驟：
1. 配制4%臺(tái)盼藍(lán)母液：稱取4g臺(tái)盼藍(lán)，加少量蒸餾水研磨，加雙蒸水至100mL，用濾紙過濾，4℃保存。使用時(shí)用PBS稀釋至0.4%。
2. 胰酶消化貼壁細(xì)胞，制備單細(xì)胞懸液，并作適當(dāng)稀釋（106 cells/mL）。
3. 取少量細(xì)胞懸液與0.4%臺(tái)盼藍(lán)溶液以9:1混合，輕輕吹打混勻，染色2~3min。
4. 顯微鏡下觀察，死細(xì)胞著淺藍(lán)色并膨大，無光澤；活細(xì)胞保持正常形態(tài)，無色透明有光澤。若需計(jì)算活細(xì)胞率則將染色的細(xì)胞懸液滴入細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
活細(xì)胞率（%）= 活細(xì)胞總數(shù)/（活細(xì)胞總數(shù)+死細(xì)胞總數(shù)）×100%
注意事項(xiàng)：臺(tái)盼藍(lán)染細(xì)胞時(shí)，時(shí)間不宜過長(zhǎng)。否則，部分活細(xì)胞也會(huì)著色，會(huì)干擾計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性。
注意：初學(xué)者易犯錯(cuò)誤： 1．水浴鍋未預(yù)熱或者未預(yù)熱到37℃。 2．水浴鍋內(nèi)凍存管太多，導(dǎo)致傳熱不佳，使融化時(shí)間延長(zhǎng)。 3．離心前忘記平衡，導(dǎo)致離心機(jī)損壞和細(xì)胞丟失。 4．一次復(fù)蘇細(xì)胞過多，忘記更換吸頭和吸管，導(dǎo)致細(xì)胞交叉污染。

IMR-90人胚肺成纖維細(xì)胞

傳代操作步驟：

一、貼壁細(xì)胞傳代

1.提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)。

2.吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞。

3.加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用。

4.胞用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ?，避免產(chǎn)生大量的氣泡。

5.將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。

二、懸浮細(xì)胞傳代

1.將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min。

2.棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液。

3.將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

培養(yǎng)的過程中，經(jīng)常見到黑色的顆?；蛐『邳c(diǎn)，這種情況是怎么引起的呢？該怎么避免呢？原因：

黑點(diǎn)，大概有細(xì)胞本身帶的，環(huán)境有的，還有人身上帶進(jìn)細(xì)胞間的,還有就是血清和培養(yǎng)基

1、如果小黑點(diǎn)有增殖趨勢(shì)，那么就有可能是污染了，需要處理；

2、如果小黑點(diǎn)沒有增殖趨勢(shì)，且不影響細(xì)胞生長(zhǎng)，也不影響實(shí)驗(yàn)的話，則可能

 a、是“黑膠蟲”，黑膠蟲究竟是一種生物還是非生物，本身就存在爭(zhēng)議。有人認(rèn)為是從血清中來的一種原蟲，也有人認(rèn)為是細(xì)菌，或是真菌，也有人認(rèn)為是血清中的蛋白的結(jié)晶。“黑膠蟲”可寄生于動(dòng)物細(xì)胞，也可以生存于培養(yǎng)基中，依靠細(xì)胞和培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)為生，并隨細(xì)胞傳代而傳代。“黑膠蟲”與細(xì)胞競(jìng)爭(zhēng)性生長(zhǎng)，開始時(shí)對(duì)細(xì)胞并沒有什么影響，但當(dāng)黑膠蟲的數(shù)量多到一定程度的時(shí)候， 細(xì)胞生長(zhǎng)就會(huì)受到影響直至死亡，嚴(yán)重影響了科研活動(dòng)的開展和進(jìn)行。以前（這個(gè)至少是10年以前），很多實(shí)驗(yàn)室在養(yǎng)細(xì)胞時(shí)用國(guó)產(chǎn)血清，那時(shí)的血清可能質(zhì)量不過關(guān)，有所謂的“黑膠蟲”，但是也沒有明確的鑒定。但是現(xiàn)在的血清，即使國(guó)產(chǎn)的，產(chǎn)品里這種現(xiàn)象就少見了。

 b、是細(xì)胞碎片，或血清里德沉淀析出，在做布朗運(yùn)動(dòng)。

 c、是核糖體，也可能是雜質(zhì)ZYC3153    人腎母細(xì)胞瘤細(xì)胞    SK-NEP-1    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3154    人腎透明細(xì)胞腺癌細(xì)胞    786-O [786-0]    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3155    人腎透明細(xì)胞癌皮膚轉(zhuǎn)移細(xì)胞    Caki-1    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3156    人腎細(xì)胞腺癌細(xì)胞    ACHN    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3157    人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞    HEC-1-A    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3158    人絨毛膜癌細(xì)胞    JEG-3    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3159    人臍靜脈細(xì)胞融合細(xì)胞    EA.ZY926    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3160    人膀胱癌細(xì)胞    5637    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3161    人輸尿管上皮永生化細(xì)胞    SV-HUC-1    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3162    人滑膜肉瘤細(xì)胞    SW 982 [SW-982, SW982]    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3163    人膀胱移行細(xì)胞癌細(xì)胞    T24    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3164    人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞    HuT 78    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3165    人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞    COLO 320DM     形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS